生物固氮 biological nitrogen fixation
【作者】閻隆飛 遊長芬
大氣中的遊離態氮分子在微生物體內還原為結合態的氨分子的過程。 具有這種能力的微生物稱固氮微生物。地球表面每年因生物固氮作用獲得的結合態氮約為 1.0∼1.8 ×10噸， 其中有0.2∼0.4×10噸係由耕種土壤中的固氮微生物所固定。 在農業生產中，充分發揮生物固氮的作用，對增加土壤中的氮素養分、提高土壤肥力具有重要作用。 對生物固氮作用的研究始於19世紀。 1838年，法國的布森戈，J.B.通過田間試驗和化學分析，最先確認三葉草和豌豆可從空氣中取得氮素。 此後俄國的M.C.沃羅寧和德國的H.黑爾裡格爾相繼證明瞭豆科植物與根瘤菌之間的共生關係。 1888年，荷蘭的拜耶林克，M.W.首次從根瘤中分離出固氮微生物的純培養體，後曾被其他研究者用作接種劑。 嗣後，研究領域從豆科植物拓寬到非豆科植物，從共生固氮發展到非共生固氮以至聯合固氮。 20世紀初歐洲和美國已有根瘤菌劑的商品生產。中國從50年代起應用根瘤菌於花生、大豆等的生產，取得增產效果。 類型 迄今已確認有固氮作用的微生物約有50個屬90多種。包括細菌、放線菌和藍藻，都屬原核生物。 其中有的是好氣性的，有的是嫌氣性的，有的是兼性的。 按固氮微生物與高等植物或其他生物之間的關係，可分3種類型。 共生固氮作用 固氮微生物與另一種能營光合作用的高等植物、或其他生物緊密地生活在一起， 彼此間形成單獨生活時所沒有的共生固氮體系﹕固氮微生物依靠與之共生的生物、 為其提供生活必需的能源和碳源，而固氮微生物則將固定的氮素、 供給共生生物作為合成氨基酸和蛋白質的氮源。 共生固氮作用又可分為﹕ 1.豆科植物與微生物的共生固氮。其中最重要的是豆科植物與根瘤菌的共生。 土壤中的根瘤菌侵入根部後形成根瘤，固氮即在根瘤中進行。可營這種共生固氮作用的豆科植物約有600 多屬。 2.非豆科植物與微生物的共生固氮。營這種共生固氮作用的微生物主要是放線菌和藍藻。 能與放線菌共生固氮的植物約有21屬200多種，常見的有木麻黃屬、榿木屬、沙棘屬、胡頹子屬、楊梅屬等。 中國經鑑定的非豆科結瘤固氮樹木已有40餘種，大多數屬於對不利環境有較強抗逆性的植物。 藍藻與非豆科植物的共生固氮，可以魚腥藻與蕨類植物滿江紅形成的共生體為代表。 在這類共生體中，能固氮的滿江紅魚腥藻生活在滿江紅小葉鱗片腹面充滿黏質的小腔內，構成共生關係， 其固氮率可達313∼670千克/(公頃•年)。滿江紅分佈廣泛尤以在熱帶和亞熱帶地區生長繁茂，是中國南方的優良綠肥。 非共生固氮作用 又稱自生固氮作用。 固氮微生物不與其他生物發生特異關係，而能獨立地生長繁殖，並將大氣中的氮分子還原為氨分子。 這類固氮作用的全過程均在其自身細胞中進行，所固定的氮素常在細胞死亡腐敗後釋放到土壤中。 屬於這類的微生物主要有細菌、藍藻和放線菌， 常見於溫帶中性土壤的有固氮菌屬中的圓褐固氮菌， 常見於熱帶和亞熱帶的酸性土壤中的是貝氏固氮菌屬。廣泛分佈於各類土壤中的有巴斯德芽孢梭菌和許多微嗜氧菌， 後者包括極毛桿菌屬(Pseudomonas )、無色桿菌屬、克氏桿菌屬和分枝桿菌屬等。 上述固氮菌在固氮過程中必須依靠外源能量，且對能量的利用效率較低， 通常每固定1分子氮所消耗的能量要比根瘤菌大10倍。此外，當土壤含有機化合態氮時，其固氮作用的進行還會受抑制。 因而自生固氮作用在農業上的應用一直是個難題。但最近已選育出這類固氮菌突變株， 當有氨存在時，其固氮活性比同條件的野生型高5萬倍。 聯合固氮作用 某些固氮微生物可生長在植物根系中的黏質鞘套內或皮層細胞之間，雖對植物有一定的專一性， 但不形成密切的共生關係，也不形成特殊的形態結構，是一種鬆散的共生現象。 現已確認的聯合固氮體系有甘蔗和貝氏固氮菌、雀稗和雀稗固氮菌、小麥和芽孢細菌、水稻和無色桿菌等。 屬於此類的固氮體系的植物多屬高光效的C植物，比C植物能分泌更多的碳水化合物， 有利於根系中微生物的生長和固氮。其固氮效率比在土壤中單獨生活時要高。 因此通過選育寄生植物接種固氮菌，並加強土壤管理，可提高根際的固氮活性。
機理
氮氣分子(N≡N)有很高的鍵能，
使之還原必須消耗大量能量。
在工業上，用化學固氮方法製造氮肥
要在鐵催化劑作用下，
用500℃的高溫及300大氣壓的高壓下
才能將氮氣還原為氨。
但固氮微生物則可在常溫常壓下完成這一過程。
因固氮微生物體內存在一種複雜的固氮系統，
它能催化氮氣的還原。固氮由2種蛋白質組成﹕
一種為含有鉬和鐵的鉬鐵蛋白，
分子量為200000﹔
另一種為含鐵的鐵蛋白，分子量為65000。
鐵蛋白具有很強的還原力，它提供電子給鉬鐵蛋白。
鉬鐵蛋白能與氮氣分子絡合，然後使之還原為氨。
在這個過程中，需要腺三磷酸 (ATP)提供能量和鐵氧還蛋白充當強還原劑。
氮氣還原為氨的化學反應式如下﹕
N＋6e＋12ATP＋12HO→
2N＋12ADP＋12Pi＋4H
式中
ADP為腺二磷酸，Pi代表無機磷酸。固氮除能還原氮氣外，還能將乙炔
(CH)還原為乙烯(CH)。
由於這個反應可用氣相色譜法測定，現已廣泛應用於田間實驗室測定固氮微生物的固氮活性。
生物固氮作用機理示意
研究趨勢
生物固氮是一個十分活躍的研究領域。
利用遺傳工程技術將豆科植物根瘤菌中的固氮基因(nif基因)、轉移到非豆科植物的禾穀類中，
以便通過生物固氮提高農業產量、減少化肥用量、和節約農業投資的設想受到廣泛注意，
並已進行了許多研究試驗。
但不少困難仍有待克服。固氮對氧十分敏感，微量氧即能使固氮失活。
豆科植物的根瘤中存在豆血紅蛋白，能與氧結合，使氧濃度降低。因此非豆科植物在固氮基因轉移成功後、
還必須具備一定的防氧的保護機制時、才能進行生物固氮。
另一困難是需要形成大量ATP，才能有足夠的能量使氮還原為氨。
氮循環
氮循環、是描述自然界中氮單質和含氮化合物之間、相互轉換過程的生態系統的物質循環。 基本概念 空氣中含有大約78%的氮氣，佔有絕大部分的氮元素。氮是許多生物過程的基本元素； 它存在於所有組成蛋白質的胺基酸中，是構成諸如DNA等的核酸的四種基本元素之一。 在植物中，大量的氮素被用於製造可進行光合作用供植物生長的葉綠素分子。 加工，或者固定，是將氣態的遊離態氮轉變為可被有機體吸收的化合態氮的必經過程。 一部分氮素由閃電所固定，同時絕大部分的氮素被非共生或共生的固氮細菌所固定。 這些細菌擁有可促進氮氣和氫化和成為氨的固氮酶， 生成的氨再被這種細菌通過一系列的轉化以形成自身組織的一部分。 某一些固氮細菌，例如根瘤菌，寄生在豆科植物（例如豌豆或蠶豆）的根瘤中。 這些細菌和植物建立了一種互利共生的關係，為植物生產氨以換取糖類。 因此可通過栽種豆科植物使氮素貧瘠的土地變得肥沃。還有一些其他的植物可供建立這種共生關係。 其他植物利用根系從土壤中吸收硝酸根離子或銨離子以獲取氮素。 動物體內的所有氮素則均由在食物鏈中進食植物所獲得。
氨
氨來源於腐生生物對死亡動植物器官的分解，被用作製造銨離子（NH4+）。
在富含氧氣的土壤中，這些離子將會首先被亞硝化細菌轉化為亞硝酸根離子(
NO2−）
然後被硝化細菌轉化為硝酸根離子（NO3−）。銨的兩步轉化過程被叫做硝化作用。
銨對於魚類來說有劇毒，因此必須對廢水處理植物排放到水中的銨的濃度進行嚴密的監控。
為避免魚類死亡的損失，應在排放前對水中的銨進行硝化處理，
在陸地上為硝化細菌通風提供氧氣進行硝化作用成為一個充滿吸引力的解決辦法。
危機
銨離子很容易被固定在土壤尤其是腐殖質和粘土中。而硝酸根離子和亞硝酸根離子則因它們自身的負電性，
而更不容易被固定在正離子的交換點（主要是腐殖質）多於負離子的土壤中。
在雨後或灌溉後，流失（可溶性離子譬如硝酸根和亞硝酸根的移動）到地下水的情況經常會發生。
地下水中硝酸鹽含量的提高關係到飲用水的安全，因為水中過量的硝酸根離子會影響嬰幼兒血液中的氧濃度、
並導致高鐵血紅蛋白症或藍嬰症候群（Blue-baby
Syndrome）
如果地下水流向溪川，富硝酸鹽的地下水會導致地面水體的富營養化，使得藍藻菌和其他藻類大量繁殖，
導致水生生物因缺氧而大量死亡。雖然不像銨一樣對魚類有毒，硝酸鹽可通過富營養作用間接影響魚類的生存。
氮素已經導致了一些水體的富營養化問題。
從2006年起，在英國和美國使用氮肥將受到更嚴厲的限制，磷肥的使用也將受到了同樣的限制。
這些措施被普遍認為是為了治理恢復被富營養化的水體而採取的。
在無氧或低氧條件下，厭氧細菌的「反硝化作用」將會發生。
最終將硝酸中氮的成分還原成氮氣歸還到大氣中去。
氮氣(N2)的轉化
有三種將遊離態的N2（大氣中的氮氣）轉化為化合態氮的方法：
1.生物固定
–
一些共生細菌（主要與豆科植物共生）和一些非共生細菌能進行固氮作用並以有機氮的形式吸收。
2.工業固氮
–
在哈伯-博施法中，N2與氫氣被化合生成氨（NH3）肥。
3.化石燃料燃燒
–
主要由交通工具的引擎和熱電站以NOx的形式產生。
另外，閃電亦可使N2和O2化合形成NO，是大氣化學的一個重要過程，但對陸地和水域的氮含量影響不大。
由於豆科植物（特別是大豆、紫苜蓿和苜蓿）的廣泛栽種、使用哈伯-博施法生產化學肥料，
以及交通工具和熱電站釋放的含氮污染成分，人類使得每年進入生物利用形態的氮素提高了不止一倍。
這所導致的富營養作用已經對濕地生態系統產生了破壞。
http://zh.wikipedia.org/zh-tw/%E6%B0%AE%E5%BE%AA%E7%92%B0
地下耕耘者
撰文：李元芳
來源：《生命世界》2007年12月號
責任編輯：孫曉潔
內容簡介
編者按：
傳統的糞肥、現代的化肥、有機肥，這些名詞對於你一定不陌生。
那麼，微生物肥料呢？微生物也可以作肥料嗎？土壤中本身不就有很多微生物嗎？
微生物肥料有什麼“過人之處”？本文將為您解答這些疑問。
微生物是人類賴以生存的重要資源之一，在農業領域裏已得到廣泛應用。
早在1890年，俄國學者就提出微生物對土壤肥力的作用，且於1894年被俄、美學者證實。
中國勞動人民很早就知道豆科植物的根瘤能肥田；還利用漚肥提高肥料的速效養分。
1937年，我國學者發表了大豆根瘤菌菌株的研究報告；
1944年我國學者對農家肥堆漚方法進行研究，並分離出一種分解纖維的細菌。
這些都是我國最早利用微生物提高土壤肥力的例證。
微生物肥料是用人工方法選育和繁殖某些有特定功能的有益微生物製成的活體製品。
將其施入土壤能加強有益微生物的活動，改善農作物的營養條件並刺激作物生長和抑制有害微生物活動，
從而對農作物產生增產效果。
由於其本身具有生產成本低、無毒無害、不污染環境等優點，
現國內在積極研究和應用，其中研究和應用最多的是固氮微生物。
固氮微生物
有固氮能力的微生物稱為固氮微生物，可分為三大類，
第一類是能和高等植物共生的，稱之為共生固氮菌。例如與豆科植物共生結瘤的各種根瘤菌；
與非豆科樹木共生的弗氏固氮放線菌；
第二類是單獨生活固氮的稱為自生固氮菌，如園褐固氮菌；
第三類則是能與禾本科植物形成鬆散聯合共生的固氮微生物，被稱為聯合固氮微生物，如固氮螺菌、
雀稗固氮菌等。
共生固氮菌中的根瘤菌是推廣最早、效果顯著的一種高效微生物肥料，能使豆類作物增產並提高土壤的氮素含量。應用辦法是在豆科作物播種前先用根瘤菌肥料拌種，使種子表面沾上大量根瘤菌，待種子發芽生根時，
在幼根周圍大量繁殖的根瘤菌，就通過根毛入侵根內並繼續在根內繁殖，刺激根組織膨大形成根瘤，
每個根瘤中都含有大量根瘤菌（類菌體）。
豆科作物通過光合作用，每同化100單位碳，就有32個單位轉運到根瘤中，而根瘤中的類菌體
每固定100單位氮素，卻只有6個單位留在根瘤中，大部分則轉運給作物的地上部分供給作物吸收利用。
豆科作物生長期間吸收的氮素、約有2/3是根瘤菌從空氣中固定下來的，平均每畝豆類作物根瘤內的根瘤菌、
能從空氣中攝取6~16公斤氮素，相當於30~80公斤硫酸銨或750~2000公斤人糞尿。
由此可見豆科作物的根瘤就是一個沒有污染的小氮肥廠。每年豆科作物根瘤固氮的氮素約有5500噸，
在農牧生產中，利用共生固氮（根瘤菌）的投入產出都在1︰15以上。經濟效益十分顯著。
自生固氮菌除有固氮能力，能分泌吲哚乙酸類似物和赤黴素一類物質外，還能生成維生素和異生長素類物質。
這些物質能刺激農作物根系發育，還能加強其他根際微生物的生命活動，從而促進土壤有機物質的礦化作用，
間接地影響著植物的礦質營養。
因此，自生固氮菌在農業生產中也得到了廣泛的應用，將它們施在較肥沃的土壤中，
每年每畝可固定氮素0.67∼1.34公斤。
進行聯合固氮作物的微生物也是一些自生固氮菌，但它們在某些植物根系中生活時，比其在土壤中單獨生活時
的固氮能力要強的多。目前，在玉米、小麥、水稻和甘蔗等作物根際應用聯合固氮菌，均有一定增產效果。
微生物肥料種類
微生物肥料的種類較多，按目前微生物製品的內含物及功能可將其分成微生物菌劑與複合微生物肥料兩大類。
微生物菌劑含有一種或兩種以上活微生物（互不頡頏），經過工業發酵製成。
有根瘤菌肥料、固氮菌肥料、磷細菌肥料、鉀細菌肥料、抗生菌肥料（具有肥效、防治作物病蟲害和刺激
作物生長作用），菌根菌肥料（寄生於特定作物的根部，能提高作物對磷、鉀營養物質的吸收）
，光合細菌肥料（通過聯合固氮提高土壤氮素營養）、植物根系促生菌肥料（促進作物生長）、
分介作物秸稈菌劑（加速作物秸稈腐熟）、堆肥發酵菌劑（促進有機廢物發酵、除異味）等。
複合微生物肥料除含有一種或兩種以上有效微生物外，還含有一些其他營養物質。
根據營養物質不同又可分為生物有機肥（微生物和有機物質複合後製成）及生物有機無機複合肥
（微生物和有機物質及無機營養元素複合製成，簡稱為“微生物複合肥料”）。
微生物肥料菌種的作用機理
現生產微生物肥料的菌種較多，
其中包括根瘤菌、固氮菌、磷細菌（巨大芽胞桿菌）、矽酸鹽細菌、芽胞桿菌（枯草芽胞桿菌、地衣芽胞桿菌、
短小芽胞桿菌）、抗生菌（5406）、光合細菌（紅螺菌）、促生細菌（假單胞菌）、
高溫發酵菌（嗜熱脂肪芽胞桿菌）、酵母菌和乳酸菌等。
現生產微生物肥料的菌種則主要集中在能固氮、解磷、解鉀和刺激生長的微生物菌種上。
空氣中約有80%是氮氣，其性質十分穩定，不能被植物直接利用，
必須將氮分子轉化成氨或其他形式氮化合物後，植物才能吸收。這種轉化是個耗能很高的過程。
固氮微生物具有固氮酶，能把大氣氮轉化成氨，能源則主要是靠植物乙太陽光為能源的光合作用。
根瘤菌和固氮菌能將空氣中的氮轉化為氨，並進而轉化成谷氨酸和穀氨醯胺，使作物能吸收利用，
利用率高達90%以上。
解磷微生物在其生命活動中能產生有機酸（乳酸、乙酸、草酸和檸檬酸），這些有機酸分解和破壞礦物晶體，
使被固定的磷素養分釋放出來。同時，在微生物的作用下，施入土壤中的磷素養分得到充分利用，
減少了被土壤固定量，促使作物獲得更多的磷素養分。
矽酸鹽細菌可借助莢膜包圍岩石礦物顆粒而吸收磷、鉀養料，
還可在生長繁殖過程中分泌低分子量有機酸分解鉀素養分。
另外矽酸鹽細菌本身細胞組成含鉀量很高，其灰分中的鉀含量高達33%-43%，
這種菌體內的鉀在菌體死亡後游離出來，也可被植物吸收利用。
微生物肥料除了具有上述固氮、解磷、解鉀的作用外，還有助於防治作物病蟲害及改良土壤理化性狀。
產品中的功能性微生物生長繁殖，在作物根際土壤微生態系統內形成優勢種群，或產生抗生素來抑制
其他有害微生物的生長繁殖，對部分有害病原菌產生拮抗作用，減少了有害微生物的危害機會。
微生物肥料都具有較強的陽離子交換能力，可以吸收更多的鉀、銨、鎂、鋅等營養元素，
防止淋失，提高土壤保肥能力
微生物肥料的特點
微生物肥料是一種新型農用肥料，它能在促進施用物件生長和提高品質的同時、
不造成施用物件產生和積累有害物質、並且對生態環境無不良影響。
為此，中國綠色食品發展中心、已將微生物肥料列入生產綠色食品允許使用的肥料，並鼓勵在生產中擴大使用。
微生物固氮的優點很多，比如節能環保、提供優質氮素營養、利用率高等等。
農作物的主要養分需氮、磷和鉀，其中氮素營養又是最重要的。要使作物增產必須施入大量氮肥。
氮素化肥的生產必須在高溫、高壓和化學催化劑存在的條件下進行。通常1.5公斤石油才生產1公斤氮肥。
而微生物固氮則可在常溫常壓下，依靠微生物本身的催化劑——固氮酶的作用，即可實現將氮分子轉化成氨，
直接被作物吸收利用。雖然生物固氮也是一個消耗能量的過程，
但提供能量的是作物以太陽為能源的光合作用，與化學固氮相比則極為低廉和環保。
根瘤菌、固氮菌能同化空氣中的氮並將其轉化為氨，又將氨轉化為穀氨醯胺類的優質氮化合物被植物吸收，
而且共生體系固定的氮素又大部分被輸送到籽粒部分，這也是豆科作物種子蛋白質含量高的一個重要原因。
化學氮肥施入土壤中，一般作物最多吸收30%，大部分則淋失或以氣態揮發及在土壤中殘留固定。
而微生物固氮，特別是共生固氮體系固氮，則大部分都被作物直接吸收利用，
少量的隨著分泌過程和根瘤衰老破潰游離出來，也可被作物根系吸收利用。
氮肥的大量使用，使轉化的硝態氮有相當部分被淋溶，最終又被排到溪流、地下水及海洋中，造成硝酸鹽污染。
另一方面，施入土壤中的化學氮、由於反硝化作用又釋放出氮氣充滿大氣、破壞了正常的氮素迴圈，
而微生物固氮則不存在這個問題。
微生物肥料還具有降低蔬菜體內硝酸鹽含量作用。蔬菜是一種容易富集硝酸鹽的植物性食品，
這種現象無害於植物本身，卻可能危害取食它的人畜的健康。實驗證明，施用不同的肥料，
蔬菜體內硝酸鹽含量差異很大，在施用化學氮肥後，蔬菜中硝酸鹽的含量明顯提高。
影響硝酸鹽在蔬菜（以番茄為例）體內積累增多的肥料類型的順序是：尿素＞糞幹＞麻餅＞堆肥＞微生物肥料。
其中以施氮素化肥的硝酸鹽含量最高，而微生物肥料最低，二者相差兩倍。微生物肥料與有機肥或尿素
配合施用，對蔬菜硝酸鹽含量仍有明顯的控制效果，結果均比單施有機肥料下降28.7%，比施尿素的下降42.5%。
微生物肥料、有提高作物營養品質的作用。根據實驗，微生物肥料可提高黃瓜、菜花的礦質營養品質，
其氮磷鉀含量提高5%-20%，維生素C含量增加，糖酸也比對照增加。
糖酸比明顯提高，特別對番茄等蔬菜，能改善生食果品的口味，產生良好的效應。
據實驗，施用微生物肥料可增進腐殖酸總量，可比施堆肥提高25.6%，並大大地改善土壤腐殖質的品質，
胡敏酸與富裏酸的比值（該值大小是土壤腐殖質品質好壞的標誌，也是土壤性狀好壞的指標）明顯增大。
施微生物肥料還使土壤的速效磷、速效鉀明顯增多，有明顯的培肥土壤的作用。
微生物肥料可促進土壤養分釋放，減少化肥用量：微生物肥料無毒無害，既能增產改善農作物品質、
又不污染環境、還能減少化肥的用量，這不僅有經濟意義，還有生態學方面的價值。
另外，應用微生物製劑還可處理畜禽糞便、作物秸稈和城市生活垃圾等有機物質，使之快速腐熟、消除異味，
起到環境淨化作用。
總之，微生物肥料能在農業可持續發展中發揮其積極作用，為城鄉人民提供更多、更好的安全、
無污染的優質農產品，以增進人民身體健康，造福子孫後代。
客觀評價微生物肥料
通常所說的微生物肥料、是指以微生物生命活動導致農作物得到特定的肥料效應，達到促進作物生長或產量增
加、或品質提高的一類製品，又稱菌肥、生物肥料、接種劑等。由其概念中可知，微生物肥料與傳統的肥料
有著較大區別。微生物肥料既包括直接提供養分的傳統肥料範疇，如根瘤菌固氮為宿主植物提供氮素營養；
也包括促生、頡頏病原微生物等效應的範疇。
後一範疇的微生物製品是目前和將來新品種研製、開發和應用更為活躍的領域。
我國對微生物肥料研究、應用已有幾十年的歷史。微生物肥料在農業生產中確實起了重要的作用，
但另一方面，應用微生物肥料未獲增產、或效果不明顯的情況是經常可以遇到的，
因為微生物肥料與其他肥料一樣，其施用效果受多種因素的制約。因此要客觀科學的看待微生物肥料的作用。
微生物肥料無用論的持有者認為土壤中已有大量的微生物，無須再施入微生物肥料。但事實上微生物肥料、
是將人工選育的優良菌株經發酵擴大，集中施行種子表面或其周圍，形成群體優勢而發揮作用的。
還有研究者則是根據自己的試驗結果、來否定所有的微生物肥料，未對影響試驗的條件、因素諸如產品品質、
保存條件、使用的作物是否符合、方法是否正確，有無配伍禁忌等進行認真分析，從而得出不夠科學的結論。
與之相反的論點、是將微生物肥料的作用無限誇大，甚至宣傳施用500g某種“微生物肥料”，
即可不再使用化肥或其他肥料。但科學研究尚未能從植物營養的角度、證明施一次微生物肥料即可不再施化肥。
無論是一概否定或是無限誇大微生物肥料的作用，或者把微生物肥料神秘化，
人為地罩上一層神秘光環都是不科學的，都不利於微生物肥料行業的健康發展。
李元芳，研究員。中國農科院土壤肥料研究所微生物室主任。
http://www.teacher.aedocenter.com/mywebB/Newbook-7/kd-06.htm